Ebbe luogo il 13 Febbraio 1503, nel corso della guerra tra francesi e spagnoli per il possesso del Regno Napoletano. La Disfida dei tredici Cavalieri Italiani, sin dall'inizio fu chiamata Disfida di Barletta, appunto perché in Barletta essa ebbe inizio ed in Barletta ebbe il suo compimento. Va considerato altresì che il luogo del combattimento, la contrada Sant'Elia del territorio della Masseria del Capitolo della Cattedrale di Trani, non fu altro che un elemento semplicemente accessorio, unicamente prescelto come territorio neutrale in quanto appartenente alla Repubblica di Venezia, e quindi non appartenente né agli spagnoli, né ai francesi. Va considerato ancora che la Disfida di Barletta ebbe un notevole valore storico squisitamente di carattere nazionale oltre che regionale, perché l'offesa ricevuta dai Cavalieri italiani, risvegliò, il sentimento dell'onore italico oltraggiato e offeso, per cui furono prescelti i migliori campioni di ogni parte d'Italia.